產品信息產品描述Hieff Trans
TM懸浮細胞專用脂質體核酸轉染試劑是一種陽離子脂質體轉染試劑，經優化專門用于懸浮細胞的轉染，且適用于DNA、RNA和寡核苷酸的轉染，對大多數真核細胞具有很高的轉染效率。
Hieff Trans
TM懸浮細胞專用脂質體核酸轉染試劑以無菌的液體形式提供。
運輸與保存方法冰袋（wet ice）運輸。產品4oC保存，一年有效。
不可冷凍！注意事項1. 為得到好的轉染效率，請先用無血清培養基（如OPTI-MEMⅠ培養基）稀釋Hieff Trans
TM Suspension Cell-Free Liposomal Transfection Reagent（以下簡稱Hieff Trans
TM），之后與DNA或RNA做混合。
2. 使用高質量的DNA或RNA有助于獲得較高的轉染效率，務必確保質粒的高純度和無菌狀態，徹底去除質粒提取過程中可能殘留的苯酚和高鹽，因為上述酚類會對細胞造成損失，而高鹽分會干擾“Hieff Trans
TM-復合物”的形成。質粒中的內毒素也是轉染的大敵，務必去除。
3. 轉染時培養基中不能添加抗生素。
4. 陽離子脂質體應該在4℃保存，要注意避免多次反復長時間開蓋，因為可能會導致脂質體氧化而影響轉染效率。
5. 需優化DNA濃度和陽離子脂質體試劑量以得到最大的轉染效率。DNA和Hieff Trans
TM的比例，通常推薦是1:2 或者1:3。
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推薦轉染條件（以293懸浮培養細胞，質粒DNA轉染為例）
最終轉染體積：30ml
轉染細胞數目：3×10
7 cells（最終細胞密度：1×10
6 cells/ml），轉染之前需要確保細胞健康，細胞活力>90%。
質粒DNA量：20–40 μg (typically use 30 μg)
轉染試劑量：40–80 μL (typically use 60 μL). Use 2 μL Hieff Trans
TM per 1 μg of plasmid DNA transfected.
操作步驟（293懸浮細胞）
使用以下步驟在
30ml總體系內轉染293細胞，轉染過程中生長培養基內不要添加抗生素，否則會降低轉染效率。轉染過程請同時設置陽性對照組和陰性對照組（無DNA，無Hieff Trans
TM）。
【注】對于其他的培養總體系，按比例放大或者縮小各組分用量。1. 轉染當天，在配制復合物之前，準備轉染需要的細胞量【見上推薦轉染條件，即28ml 生長培養基內加入3×10
7 cells，臺盼藍排斥法確定細胞活力和小量細胞成團量。劇烈漩渦混勻45s以打破細胞團，并用計數器測定總細胞量。細胞活力需>90%?！?【
注】：為了達到良好效率，確保單細胞懸液。2. 按照以下方法配制Hieff Trans
TM-DNA復合物，
a, 用無血清培養基（如OPTI-MEM I）稀釋30μg質粒DNA，使其終體積為1ml；
b, 用無血清培養基（如OPTI-MEM I）稀釋60μl Hieff Trans
TM，使其終體積為1ml；輕輕混勻，于室溫孵育5min；【
注意】：過長時間孵育會降低效率。c, 孵育5min之后，將稀釋的質粒DNA加入稀釋的Hieff Trans
TM，使其總體積為2ml。輕輕混勻。
d, 室溫孵育20-30min，使得DNA-Hieff Trans
TM復合物形成。此時溶液可能會混濁，但不會影響轉染。
【注意】：DNA-脂質體復合物室溫至少穩定保存5h。
3. 孵育完全后，將2ml DNA-Hieff Trans
TM復合物加入28ml 含293懸浮細胞的生長培養基內，使得細胞最終的密度約為1×10
6 cells/ml。對于陰性對照，用2ml無血清培養基（如OPTI-MEM I）替換。
4. 37℃，8% CO
2軌道搖床培養，轉速125rpm，直至進行轉基因表達分析，無需去掉復合物或更換培養基。然而，可能有必要在4-6h后更換生長培養基，不會降低轉染活性。
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